熟伦熟女新五十路熟女-大香蕉大香蕉最新在线观看-视频在线观看日韩一区-91国产成人在线视频

產(chǎn)品中心PRODUCTS CENTER
技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 傷口愈合實(shí)驗(yàn)

傷口愈合實(shí)驗(yàn)

更新時(shí)間:2016-07-19   更新時(shí)間:2016-07-19   點(diǎn)擊次數(shù):8050次

傷口愈合實(shí)驗(yàn)--TARBP2的類(lèi)泛素化(SUMOylated)調(diào)節(jié)miRNA/siRNA作用

小RNA介導(dǎo)的基因沉默對(duì)于基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄前調(diào)節(jié)尤其重要,但是,如何調(diào)節(jié)miRNA/siRNA的作用機(jī)理還并未研究清楚。上海交大醫(yī)學(xué)院的科研人員在2015年的NATURE COMMUNICATION上發(fā)的文章中研究調(diào)節(jié)miRNA/siRNA發(fā)揮作用的因子。研究表明,TARBP2的類(lèi)泛素化(SUMOylated)不會(huì)對(duì)成熟的的miRNA的產(chǎn)物有左右,但是會(huì)影響miRNA/siRNA的效用。其會(huì)引入Ago2來(lái)形成RNA沉默聚合體,并且會(huì)介導(dǎo)表達(dá)更多的miRNA前體結(jié)合到這一復(fù)合體上,從而進(jìn)一步介導(dǎo)RNAi。

傷口愈合實(shí)驗(yàn)是體外研究細(xì)胞遷移的一個(gè)有用的實(shí)驗(yàn)。原理是人為的在鋪板的單層細(xì)胞中制造一個(gè)空白的無(wú)細(xì)胞的地帶,然后對(duì)這個(gè)無(wú)細(xì)胞地帶的邊緣的細(xì)胞進(jìn)行觀察;這些邊緣的細(xì)胞會(huì)開(kāi)始進(jìn)行遷移活動(dòng),并且終覆蓋整個(gè)無(wú)細(xì)胞的區(qū)域,重新互相接觸在一起。本研究中用到傷口愈合的實(shí)驗(yàn),使用TARBP2和pri-miR130b共表達(dá),通過(guò)對(duì)傷口愈合的速度的影響,得出TARBP2-K52R可以抑制pri-miR130b對(duì)傷口愈合過(guò)程的影響。

SUMOylation of TARBP2 regulates miRNA/siRNA efficiency.
Chen C, Zhu C, Huang J, Zhao X, Deng R, Zhang H, Dou J, Chen Q, Xu M, Yuan H, Wang Y, Yu J. 
Nat Commun. 2015 Nov 19;6:8899. doi: 10.1038/ncomms9899


在文中,使用Ibidi開(kāi)發(fā)的傷口愈合插件進(jìn)行了傷口愈合實(shí)驗(yàn)。這是一種雙孔的硅膠插件,可以放在培養(yǎng)皿中,插件兩孔間的孔壁寬度為500μm。將細(xì)胞種在插件中,等待細(xì)胞貼壁長(zhǎng)滿后,將插件移除,這樣,兩孔間的縫隙就是一個(gè)無(wú)細(xì)胞的“劃痕”。


(一)實(shí)驗(yàn)材料
1)細(xì)胞:    serum starved A549luc stable cell line 
2)實(shí)驗(yàn)耗材:   傷口愈合插件培養(yǎng)皿 (ibidi, 81176) 
3)細(xì)胞培養(yǎng)基:  DMEM   (Hyclone) 
4)試劑:  Lipofectamine 2000 (Invitrogen)
5)滅菌鑷子

(二)實(shí)驗(yàn)步驟
1)鋪細(xì)胞(圖三)
?將ibidi傷口愈合培養(yǎng)皿底部的保護(hù)膠帶撕除。
?在ibidi細(xì)胞插件的每孔中加入5 × 103的細(xì)胞懸液。注意不要大力晃動(dòng)培養(yǎng)皿。以防止細(xì)胞不均勻。
?在37。C培養(yǎng)箱中孵育24小時(shí)。


圖三:A. 去除培養(yǎng)皿底部的保護(hù)膠帶。B.C.在ibidi傷口愈合插件中加入細(xì)胞。

2)形成“劃痕”
?采用無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞4小時(shí)
?如圖四所示,小心的用鑷子夾住插件的一個(gè)角,將插件移除。 
           
?移除插件后,要用顯微鏡檢查是否形成合格的“劃痕”。
?小心的清洗細(xì)胞,之后加入2ml培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)(圖五)。


3)采集并分析圖像
?在顯微鏡下選取能同時(shí)看到“劃痕”和兩邊細(xì)胞的視野進(jìn)行成像,“劃痕”的方向好是水平或者垂直。
?采集0h和10h的圖像,并且分析每張圖的細(xì)胞覆蓋劃痕區(qū)的面積。


(三)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

如圖所示,共表達(dá)pri-miR130b和TARBP2-WT(miR130b-WT)比單獨(dú)表達(dá)pri-miR130b(miR130b-con)對(duì)細(xì)胞遷移更有抑制作用,而將pri-miR130b和TARBP2-K52R(miR130b-K52R)共表達(dá)對(duì)于細(xì)胞遷移基本沒(méi)有抑制作用了。

聯(lián)


欧美三级不卡在线观线看| 久热久热精品视频在线观看| 国产精品九九九一区二区| 欧美丝袜诱惑一区二区| 国产精品亚洲欧美一区麻豆| 欧美亚洲三级视频在线观看| 国产日韩中文视频一区| 久久精品福利在线观看| 91天堂免费在线观看 | 亚洲av一区二区三区精品| 免费大片黄在线观看国语| 大香蕉大香蕉手机在线视频| 亚洲综合日韩精品欧美综合区| 香蕉久久夜色精品国产尤物 | 成人你懂的在线免费视频| 暴力性生活在线免费视频| 亚洲乱妇熟女爽的高潮片| 免费大片黄在线观看日本| 欧美丝袜诱惑一区二区| 日韩成人高清免费在线| 欧美激情床戏一区二区三| 亚洲中文字幕亲近伦片| 亚洲色图欧美另类人妻| 黄男女激情一区二区三区| 黄色国产精品一区二区三区| 日本本亚洲三级在线播放| 久久热在线免费视频精品| 不卡视频免费一区二区三区| 日木乱偷人妻中文字幕在线| 91插插插外国一区二区婷婷| 99精品国产自在现线观看| 亚洲精品成人福利在线| 在线观看视频国产你懂的| 国产欧美一区二区久久| 欧美日韩综合免费视频| 日韩美成人免费在线视频| 东京热电东京热一区二区三区| 日韩欧美国产亚洲一区| 在线欧洲免费无线码二区免费| 国内自拍偷拍福利视频| 久久精品中文扫妇内射|