熟伦熟女新五十路熟女-大香蕉大香蕉最新在线观看-视频在线观看日韩一区-91国产成人在线视频

產(chǎn)品中心PRODUCTS CENTER
技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 可視的細(xì)胞趨化實驗

可視的細(xì)胞趨化實驗

更新時間:2016-06-17   更新時間:2016-06-17   點擊次數(shù):4339次

細(xì)胞趨化性(Chemotaxis,亦被稱為化學(xué)趨向性)是趨向性的一種,指細(xì)胞、細(xì)菌及其他單細(xì)胞、多細(xì)胞生物依據(jù)環(huán)境中某些化學(xué)物質(zhì)而趨向的運動。趨化性對細(xì)胞的發(fā)展和其他正常功能一樣*。

在生物材料移植的時候,快速的纖維血管化是成功移植的先決條件之一。尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)和組織型纖溶酶原激活物(tPA)或纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)在纖維蛋白溶解中都發(fā)揮了重要的作用。這三種蛋白近均被報道在無可溶纖維蛋白的細(xì)胞過程中有表現(xiàn)出*的作用,比如細(xì)胞粘附,遷移和增殖。

德國的科研人員發(fā)現(xiàn)使用內(nèi)皮細(xì)胞做趨化實驗,發(fā)現(xiàn)uPA,tPA和PAI-1對內(nèi)皮細(xì)胞的趨化遷移行為都有顯著的影響。

 

 

Components of the plasminogen activation system promote engraftment of porous polyethylene biomaterial via common and distinct effects.

Reichel CA, Hessenauer ME, Pflieger K, Rehberg M, Kanse SM, Zahler S, Krombach F, Berghaus A, Strieth S.
PloS one, 2015, 10.1371/journal.pone.0116883

 

 

一、實驗材料準(zhǔn)備:

 

  • 倒置顯微鏡,具有4X相差物鏡和定時拍照功能(Nikon)
  • 鏡載加熱孵育系統(tǒng)(37,5%CO2
  • 可選配置:全自動載物臺,自動對焦系統(tǒng)
  • 分析軟件:手動分析軟ImageJ的“Manual Tracking”模塊和ibidi公司的“Chemotaxis and Migration Tool” 進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。
  • HUVEC 細(xì)胞  (Human umbilical vein endothelial cells from Promocell)
  • tPA,uPA,PAI-1 (Sino Biological)
  • Matrigel (Corning)
  • ECGM培養(yǎng)基 (Promocell)
  • 細(xì)胞趨化載玻片(圖一)        (ibidi)

 

圖一,ibidi 細(xì)胞趨化載玻片圖示,如圖所示,細(xì)胞種在中間通道,兩邊的儲液池可以放不同的刺激因子,從中間通道的觀測可以得到細(xì)胞對刺激因子的趨向性,本例是使用一邊加入uPA、tPA或PAI-1,另外一邊放入培養(yǎng)基作為實驗組,兩邊都放培養(yǎng)基作為對照組。

 

 

  • 細(xì)胞趨化實驗

 

 

  1. 實驗步驟

 

  • 將細(xì)胞與30%Matrigel的ECGM稀釋液混合,密度為3×106 cells/cm2,直接加入ibidi細(xì)胞趨化載玻片的中間通道中(圖二)

 

圖二,在觀測通道中加入細(xì)胞-基質(zhì)膠混合液

  • 將細(xì)胞趨化載玻片放入培養(yǎng)箱中30-35分鐘,等待膠凝結(jié)
  • 膠凝結(jié)后后分別在兩邊儲液池中加入60μl的30 ng/mL的uPA、20 ng/mL的tPA或1 μg/mL的PAI-1和無化學(xué)趨化物培養(yǎng)基作為細(xì)胞趨化實驗(+/-)(圖三)

圖三:加入X-lkd IIIA4抗體(紅色)和無化學(xué)趨化物培養(yǎng)基(藍(lán)色)

在兩邊儲液池中均加入60μl的無化學(xué)趨化物培養(yǎng)基作為空白對照(-/-)或均加入趨化因子為陽性對照(+/+)(圖四)

圖四:加入無化學(xué)趨化物培養(yǎng)基(藍(lán)色)作為空白對照

 

  • 按說明,將通道加液孔塞緊后可以進行圖像采集
  • 將載玻片置入鏡載加熱孵育系統(tǒng)中,調(diào)整好采集位點,進行20小時的觀測,每10分鐘采集一張圖片

 

  • 圖像數(shù)據(jù)處理
  1. 手動細(xì)胞軌跡追蹤
  • 下載ImageJ,并安裝Manual Tracking模塊
  • 導(dǎo)入采集的系列圖像到ImageJ中,打開模塊“Manual Tracking”,選擇“Add track開始記錄細(xì)胞軌跡
  • 選擇一個細(xì)胞,按照時間點單擊細(xì)胞,*點擊后,會有新窗口跳出來顯示初始位置,以后每次點擊,都將在這個新窗口中產(chǎn)生一個該細(xì)胞隨著時間的新坐標(biāo)
  • 統(tǒng)計完足夠的細(xì)胞軌跡后,保存軌跡坐標(biāo)表格
  • 至少收集30個細(xì)胞的軌跡才具有統(tǒng)計學(xué)意義,避免同一細(xì)胞追蹤兩次,去除由于凋亡會而不能采集完整的軌跡的細(xì)胞

 

四、實驗結(jié)果:

 

圖五:uPA,tPA和PAI-1對內(nèi)皮細(xì)胞的趨化遷移行為的影響。A)為在趨化因子存在下,HUVEC細(xì)胞的趨向性運動軌跡。B)為統(tǒng)計分析結(jié)果說明,HUVEC細(xì)胞對uPA,tPA和PAI-1都有證趨向行為。

聯(lián)


久久夜色精品国产高清不卡 | 久久精品国产99精品亚洲| 精品视频一区二区三区不卡| 日本一区不卡在线观看| 99久久国产精品亚洲| 欧美午夜视频免费观看| 最近日韩在线免费黄片| 午夜久久精品福利视频| 欧美日韩少妇精品专区性色| 亚洲国产精品肉丝袜久久| 一区二区免费视频中文乱码国产 | 日本午夜免费啪视频在线| 久久热这里只有精品视频| 成年女人午夜在线视频| 中文字幕高清不卡一区| 亚洲精品av少妇在线观看| 国产精品白丝久久av| 激情综合五月开心久久| 国产永久免费高清在线精品| 免费特黄欧美亚洲黄片| 老熟妇乱视频一区二区| 久久热在线视频免费观看| 国产精品久久熟女吞精| 欧美小黄片在线一级观看| 国产又粗又深又猛又爽又黄| 亚洲中文字幕高清乱码毛片| 99久免费精品视频在线观| 91国内视频一区二区三区| 成人午夜免费观看视频| 在线观看那种视频你懂的| 国产a天堂一区二区专区| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产亚洲欧美自拍中文自拍| 亚洲天堂久久精品成人| 六月丁香六月综合缴情| 亚洲精品国男人在线视频| 精品久久少妇激情视频| 精品一区二区三区免费看| 亚洲一区二区三区日韩91| 欧美区一区二在线播放| 暴力性生活在线免费视频|